“你以为多肽合成是照着流程点按钮，其实每一步都在赌成功率。”
——这是我第一次独立跑完整条多肽合成流程后，最真实的感受。

如果你刚接触多肽合成，或者正在被纯度低、杂峰多、重复失败折磨，大概率都会有一个问题：

流程我都会，为什么结果就是不对？

问题不在你“没操作”，
而在于——你不知道每一步真正的目的是什么。

这篇文章，我不打算用教科书式语言，而是从实际科研和定制合成角度，把多肽合成从树脂选择 → 延伸 → 裂解 → 纯化整条流程，一环一环拆开讲清楚。

为什么“懂流程”和“会合成”，完全是两回事？

多肽合成最容易让人产生错觉的一点是：

每一步都不复杂，但每一步都能决定成败。

流程看起来很线性，但本质上是一个容错率极低的系统：

• 前面一个小问题

• 后面会被无限放大

• 最终集中爆发在“纯度”和“得率”上

所以，与其记步骤，不如先搞清楚：
每一步存在的意义是什么。

第一步：树脂选择 —— 多肽合成真正的“地基”

很多人把树脂当成“耗材”，但实际上：

树脂选错，后面做得再好，也很难救回来。

1. 树脂在多肽合成中到底干什么？

一句话总结：

树脂是多肽链生长的“固定支架”。

• 氨基酸不是在溶液里乱撞

• 而是一节一节接在树脂上

• 每一步反应，都是“在树脂表面完成”

这也意味着：

• 树脂性能，直接影响反应效率

• 膨胀性、负载量，都会影响最终结果

2. 不同树脂，对合成结果影响有多大？

很多“合成失败”的项目，本质是：

序列难度 ≠ 树脂匹配度

第二步：氨基酸偶联 —— 最核心、也是最容易失败的环节

如果只能选一个“最重要步骤”，
那一定是——氨基酸偶联。

1. 偶联在做什么？

简单说就是：

• 把下一个氨基酸

• 精准地接到现有肽链末端

问题在于：

• 每接一次，位阻都会变大

• 肽链越长，成功率越低

2. 为什么偶联“看着成功，其实已经失败”？

这是新手最容易忽略的点。

偶联失败往往不是“完全没反应”，而是：

• 80% 接上

• 20% 没接上

这 20%，在后面会变成：

• 杂峰

• 难分离

• 纯度怎么也上不去

3. 哪些情况偶联失败率最高？

第三步：Fmoc 脱保护 —— 不起眼，却决定“链能不能继续长”

很多人对脱保护的态度是：

“按流程做就行。”

但现实是，脱保护失败，后面全部白搭。

1. 脱保护的本质是什么？

一句话解释：

把“被封住的反应位点”，重新打开。

如果脱不干净：

• 下一步氨基酸根本接不上

• 或者只接在一部分链上

2. 脱保护常见翻车点

• DMF 含水量高

• 碱液浓度波动

• 清洗不充分

• 自动合成中程序参数不匹配

尤其在高通量或自动合成中，
脱保护问题非常隐蔽，但后果极其严重。

第四步：重复循环 —— 多肽“失败率累积”的真正来源

多肽合成的残酷之处在于：

失败概率是叠加的。

哪怕每一步成功率是 99%，
做 50 步，理论成功率也会明显下降。

这也是为什么：

• 长肽

• 修饰肽

• 结构复杂肽

失败率明显更高。

第五步：裂解 —— 从“树脂上的肽”变成“真正的肽”

裂解，是多肽合成中心理落差最大的一步。

因为：

• 前面看不见成品

• 到这一步，终于“见真章”

1. 裂解在做两件事

• 把肽从树脂上切下来

• 同时去掉侧链保护基

听起来简单，但实际上：

• 条件太弱 → 去不干净

• 条件太强 → 肽被破坏

2. 哪些肽对裂解最敏感？

第六步：纯化 —— 很多“合成失败”，其实死在这里

这是最容易被误判的一步。

很多人会说：

“我们没合成出来。”

但事实上：

肽是合成出来了，只是没被分离出来。

1. 纯化失败的典型表现

• 有峰，但不是目标峰

• 峰形拖尾

• 回收率极低

• 重复性差

2. 纯化常见问题对照表

整条多肽合成流程速览表（适合收藏）

真正的多肽合成，不是“照流程”，而是“懂逻辑”

如果你看到这里，会发现一个事实：

多肽合成流程不复杂，
复杂的是每一步背后的判断。

真正拉开差距的，从来不是：

• 设备

• 试剂

• 流程图

而是：

你知不知道，这一步失败会带来什么后果。