-多肽修饰与多肽合成说明书
本说明书由 南京肽研生物科技有限公司（Typeptide，域名：www.typeptide.com）编写，旨在为科研客户提供清晰、系统、全面的多肽服务说明，包含：多肽修饰类别、多肽合成流程、交付标准、质量控制体系、常见问题解答及合作指南。
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📌 一、多肽修饰服务简介
多肽修饰（Peptide Modification）是指在天然氨基酸链基础上，通过化学或酶学方式添加功能基团，从而提升稳定性、增加脂溶性、提高半衰期或实现特定的生物学检测功能。
南京肽研生物提供超过 50+ 类专业多肽修饰方式，覆盖科研、药物筛选、疫苗研究、材料科学等 12 个方向。
✨ 可实现的常见修饰类型（部分列举）
- 荧光标记（FITC、FAM、TAMRA、Cy3/Cy5 等）
- 生物素化（Biotin）
- 脂肪酸修饰（Palm、Stearic）
- PEG修饰（2k、5k、10k）
- 环化多肽（头尾环化、二硫键环化）
- 磷酸化修饰
- 甲基化、乙酰化修饰
- D-氨基酸替换、反转序列
- 多支链多肽（MAP 多肽）
- 点击化学（Click Chemistry）
📌 二、多肽合成流程（SOP 标准流程）
所有项目均采用固相合成（SPPS）工艺，通过 Fmoc 策略实现高纯度多肽制备。
- 项目评估：分析多肽序列、疏水性、二硫键可能性
- 工艺路线设计：评估修饰位置、保护策略、后处理方式
- 固相合成（SPPS）：自动化多肽合成仪逐步 elongation
- 裂解与脱保护：TFA/TIS 体系
- 粗品检测：LC-MS 初筛
- 纯化：RP-HPLC 进行 ≥95% 或 ≥98% 纯度制备
- 冻干：真空冷冻干燥获得白色粉末
- 复测：LC-MS + HPLC 全面报告
- 包装与发货：无菌管装，低温运输
📌 三、常见多肽修饰项目说明
1. 荧光标记多肽（Fluorescent Peptides）
常用荧光基团：
| 类型 | 波长特征 | 科研用途 |
|---|
| FITC | Ex 495 / Em 519 | 成像、细胞定位 |
| FAM | Ex 495 / Em 520 | 分子探针 |
| Cy3 | Ex 554 / Em 568 | 流式、活体成像 |
| Cy5 | Ex 650 / Em 670 | 深层组织成像 |
2. PEG 修饰（PEGylation）
优点：
- 提高血浆半衰期（延长 3～10 倍）
- 增加溶解度，降低免疫原性
- 提升药代动力学性质
3. 环化多肽
可实现三类环化：
📌 四、交付内容（标准报告）
- HPLC 纯度报告（PDF）
- 质谱检测报告（LC-MS）
- 批次号与 COA 文件
- 冻干粉（按客户规格灌装）
📌 五、质量控制体系（QC）
所有产品均执行 ISO 标准化流程：
- 原料通过 ≥99% 纯度验证
- 每批次双重 HPLC 复检
- 双系统 LC-MS 交叉比对
- 低温仓储、全程温控物流
📌 六、常见问题（FAQ）
1. 多肽多久可以完成？
普通多肽：7–10 天；复杂修饰：10–20 天。
2. 最低合成量是多少？
5mg 起订，可根据客户需求扩展至克级。
3. 可否提供定制化建议？
可以。我们提供免费序列优化与结构评估。
📌 八、联系我们
南京肽研生物科技有限公司（Typeptide）
- 公司：南京肽研生物科技有限公司
- 网址：www.typeptide.com
📌 九、补充详解 — 多肽纯化的技术细节
多肽纯化是获得高纯度、多肽同一性产品的关键步骤。我公司常用并推荐以下纯化技术（按常用顺序排列），并在实际项目中常结合两种或以上方法以达到工艺优化目标。
1. 反相高效液相色谱（RP-HPLC，Preparative HPLC）
- 原理：基于肽分子疏水性差异，采用 C18 或 C8 固相，水/乙腈（含0.1% TFA 或 0.1% FA）梯度洗脱。
- 适用范围：绝大多数短肽与中长肽（2–50 aa），尤其用于高纯度制备（≥95%、≥98%）。
- 关键参数：柱型（粒度）、流速、梯度斜率、样品溶剂、上样量与回收率。
- 常见问题与优化：疏水性极强的肽可能造成峰拖尾，可加入有机修饰或改用 C8/苯基柱；带正电或强极性肽可在流动相 pH 处做调整。
2. 尺寸排阻色谱（SEC / Gel Filtration）
- 依据分子量分离，常用于去除低分子杂质（试剂残留、保护基）或做缓冲置换（脱盐）。
- 适用于需要温和条件保护构象的环化肽或标记肽。
3. 离子交换色谱（IEX）
- 基于净电荷差异分离，强阳离子型/阴离子型肽可利用 pH 梯度或盐梯度实现分离。
- 适合带大量带电氨基酸序列或需去除同位素/去保护副产物的场景。
4. 固相萃取（SPE）与脱盐
- SPE 卡柱（C18、C8）常用于粗品释样、初步富集和去除有机溶剂残留，为 HPLC 上样做前处理，提高回收率与分离效果。
5. 逆流色谱 / 高级在线纯化方案
- 对于克级放大生产，采用连续流或逆流色谱系统以提升通量及回收效率。
6. 其他辅助技术
- 超滤与透析（用于缓冲置换与浓缩）
- 冻干（Lyophilization）工艺优化（冷凝、预冻、一次干燥、二次干燥参数）以保证粉末疏松、易溶解
纯化流程小结：我们通常以 RP-HPLC 为核心，通过 SPE 预处理 → RP-HPLC 分级收集 → 合并目标峰 → 脱盐/透析 → 冻干制备最终产品。对于复杂修饰或规模化生产，会在工艺中加入 IEX 或 SEC 做二次精制。
📌 十、LC‑MS 检测原理与解读指南
LC‑MS 是多肽鉴定与纯度确认的核心技术，主要包括液相色谱（LC）分离和质谱（MS）检测两部分。
1. LC（液相色谱）部分
- 作用：将混合物中各组分按疏水性或其他理化性质分离，使得进入质谱的每个峰尽可能单一。
- 常用配置：反相 C18 柱，水/乙腈梯度，0.1% 甲酸或 0.1% TFA（用于色谱峰形优化）。
2. MS（质谱）部分：常用 Ionization 与检测方式
- ESI（电喷雾电离）：适合液相界面，能产生带多个电荷的分子离子（m/z 出现多价分布），适用于中小肽的精确质量测定与串联质谱（MS/MS）碎片化分析。
- MALDI‑TOF：基质辅助激光解吸电离，通常得到单电荷分子峰（M+H），简便快速，适用于快速分子量检测与大肽/蛋白样本。
3. 结果解读要点
- 分子量确认：比对实验测得 m/z 与理论分子量（考虑修饰与离子化方式）。
- 同位素峰分布：检查同位素分布是否与理论一致，有助于确认组成与修饰数目。
- 碎片离子（MS/MS）：用于序列确认，常见 b/y 离子系列需与理论谱匹配。
- 杂峰/副产物识别：脱保护不完全、氧化（Met 氧化）、脱水（失 H2O）等常见修饰会在谱图中呈现可识别偏移。
检测报告：我司出具完整 LC‑MS 原始谱图、解释说明与 COA，必要时提供 MS/MS 解析文件与碎片对照表。
📌 十一、多肽难度评估等级（A / B / C / D）
为便于客户快速判断合成与纯化可能遇到的技术复杂度，我们提供四级难度划分（含说明、可能的额外工艺与时间预期）：
| 等级 | 特征 | 常见问题 | 处理建议与预期 |
|---|
| A（简单） | 短肽 < 15 aa，疏水性中等，无复杂修饰 | 耦合效率高，纯化容易 | 常规 SPPS + RP‑HPLC，5–8 天完成 |
| B（中等） | 15–30 aa，含疏水/易缠绕序列或单一标记 | 部分氨基酸难耦合，回收率略低 | 采用双次耦合、特殊耦合试剂，纯化可能需要多次梯度，8–14 天 |
| C（困难） | >30 aa，富疏水段、多个二硫键、复杂保护策略或大分子修饰 | 聚集、低溶解、复杂副产物 | 需分段合成/肽段拼接、环化优化，多轮纯化，2–6 周 |
| D（非常困难 / 挑战性） | 多处 PTM、长链脂肪酸/PEG 大分子修饰、高度疏水或含极易氧化残基 | 低回收、难以纯化、稳定性差 | 建议先做小规模工艺开发 (mg 级)；中试放大需专门工艺时间与费用，时间依项目而定 |
注：以上为常见估算，具体等级判定会在提交序列后由我司技术团队免费评估并给出详细工艺建议与报价。
📌 十二、多肽储存、包装与运输建议（详细规范）
1. 干粉（冻干）产品的储存
- 短期（≤1 个月）：4°C 干燥避光保存；
- 长期（>1 个月）：-20°C 或推荐 -80°C 分装保存；
- 建议将产品分装成小管（避免反复冻融）、使用防潮铝箔袋或棕色安瓿以防光氧化；标注产品编号、批次、纯度、保存条件与到期日。
2. 溶液状态的储存
- 建议以缓冲液或水按实验需要分装，低温保存（2–8°C 或 -20°C），并避免反复冻融；
- 加入少量抗氧化剂（如 0.01% 抗坏血酸）或 BSA（仅用于非分析用途）可提升稳定性，但需与应用兼容性确认。
3. 包装与运输
- 小批量国内快递：常温或冰袋，根据肽稳定性选择；速递单与包装标注保存条件。
- 需冷链/干冰运输：对于对温度敏感或要求高稳定性的修饰肽，使用干冰或冰盒并选择次日达物流。
- 国际运输：需遵守目的国生物与化学品进口规定，提供发票、COA、MSDS（如需要）与商业发货单；如为疫苗样品或可能受限物质，需提前沟通报关细节。
- 温度监控：批量或高价值货物建议使用温度记录仪或实时温控监控；交付时提供温度曲线记录（按客户要求）。